RESUMO A criopreservação é uma técnica que pode potencialmente conservar o germoplasma de espécies do gênero Coffea por tempo indeterminado. O objetivo neste estudo foi avaliar os aspectos fisiológicos, bioquímicos e ultraestruturais de sementes criopreservadas de Coffea arabica L., cultivar Catuaí amarelo IAC 62, submetidas a diferentes protocolos de desidratação, pré-resfriamento, resfriamento, reaquecimento e uso de água catódica. De acordo com cada protocolo as sementes foram submetidas à secagem rápida ou lenta, até 17 ou 20% de umidade (base úmida), resfriadas por diferentes maneiras e, em seguida, foram imersas em nitrogênio líquido por 24 horas. Diferentes tempos de reaquecimento em banho-maria também foram utilizados. Análises fisiológicas, bioquímicas e ultra-estruturais foram realizadas nas sementes após as etapas de criopreservação. O teor de umidade a 17% bu é o fator chave para a criopreservação de Coffea arabica L., umidade em que as sementes apresentam melhor qualidade fisiológica e estruturas celulares mais preservadas. O pré-resfriamento das sementes de café antes da imersão em nitrogênio líquido é dispensado por não apresentar vantagens em relação à imersão direta. Os tempos de reaquecimento testados (2, 4 e 6 minutos) e o uso de água catódica não causam alterações na qualidade fisiológica e bioquímica, bem como nas estruturas celulares das sementes criopreservadas de Coffea arabica L. O padrão de estrutura celular observado em todas as sementes indica que o dano da criopreservação é menos drástico nas células dos embriões do que nos endospermas, sendo este último menos tolerante aos estresses de desidratação, pré-resfriamento e reaquecimento.

ABSTRACT Cryopreservation is a technique that may potentially conserve the germplasm of species of the Coffea genus for an indeterminate time. The aim of this study was to evaluate the physiological, biochemical and ultrastructural characteristics of cryopreserved seeds of Coffea arabica L., cultivar Catucaí amarelo IAC 62, which was subjected to different protocols regarding dehydration, precooling, cooling, rewarming and cathode water use. According to each protocol, the seeds were subjected to fast or slow drying to moisture contents of 17 or 20% (wet basis), cooled in different ways, and then immersed in liquid nitrogen for 24 hours. Different rewarming times in a water bath were also used. Physiological, biochemical and ultrastructural analyses were performed on the seeds after the cryopreservation steps. Moisture content at a 17% wb is the key factor for the cryopreservation of Coffea arabica L. seeds, which have better physiological quality and better preserved cell structures. Precooling of coffee seeds before immersion in liquid nitrogen does not provide advantages compared to direct immersion. The rewarming times tested (2, 4, and 6 minutes) and cathode water use did not cause changes in the physiological and biochemical quality or in the cell structures of Coffea arabica L. cryopreserved seeds. The pattern of cell structure observed in all seeds indicates that the damage from cryopreservation is less drastic in the cells of the embryos than in those of the endosperm, with the latter less tolerant to the stresses of dehydration, precooling, and rewarming.

RESUMO O café é umas das principais commodities agrícolas do país, sendo importante a conservação do material vegetal para os programas de melhoramento genético. A criopreservação é uma alternativa promissora para conservar em longo prazo o germoplasma de espécies consideradas recalcitrantes. Entretanto, estudos devem ser conduzidos para alcançar a máxima sobrevivência de plântulas após imersão em nitrogênio líquido. Objetivou-se neste trabalho estabelecer um protocolo de criopreservação para armazenar sementes de Coffea canephora Pierre, aplicando-se dois métodos de criopreservação, resfriamento lento e rápido. As sementes foram submetidas à secagem em sílica gel, até o teor de água de 0.25 g g-1. No primeiro experimento, as sementes secas foram submetidas a tratamentos de resfriamento lento nas velocidades -1 ºC min.-1, -3 ºC min.-1 e -5 ºC min.-1 até as temperaturas finais de -40 ºC, -50 ºC, e -60 ºC, por meio de um biocongelador, e posteriormente imersas em nitrogênio líquido. No segundo experimento, foi selecionado o melhor resultado do primeiro experimento e comparado com o resfriamento rápido, em que as sementes secas, com 0.25 g g-1 de umidade, foram imersas diretamente em nitrogênio líquido. As alterações fisiológicas e bioquímicas ocorridas nas sementes após criopreservação foram avaliadas. As sementes de Coffea canephora respondem melhor a criopreservação por resfriamento rápido quando comparado ao resfriamento lento. A secagem das sementes de Coffea canephora até o teor de água de 0.25 g g-1 não prejudica a viabilidade das sementes. As enzimas catalase e esterase são bons marcadores bioquímicos para sementes de café criopreservadas e sua atividade é maior nas sementes de maior qualidade fisiológica.

ABSTRACT Coffee is one of the main agricultural commodities in the country, and it is important to conservation of plant material for breeding programs. Cryopreservation is a promising alternative for preserving in the long-term the germplasm of species considered recalcitrant. However, studies should be performed to achieve maximum survival of seedlings after immersion in liquid nitrogen. The objective of this work was to find a cryopreservation protocol for storing seeds of Coffea canephora, studying two methods of cryopreservation, slow and fast cooling. Seeds were subjected to drying in silica gel up to the water content of 0.25 g g-1. In the first experiment, dried seeds were subjected to treatments of slow cooling at speeds of -1 ºC min-1,-3 ºC min-1 and -5 ºC min-1 until the end temperatures of -40 ºC, -50 ºC and -60 ºC, by means of a bio freezer and subsequently immersed in liquid nitrogen. In the second experiment, the best result was selected of the first experiment and compared with the rapid cooling, in which dried seeds, with 0.25 g g-1 of water content, were immersed directly into liquid nitrogen. Physiological and biochemical alterations occurring in the seeds after cryopreservation were evaluated. Coffea canephora seeds respond better to cryopreservation by rapid cooling, when compared to slow cooling. Drying, one of the cryopreservation steps does not affect the viability of Coffea canephora Pierre seeds, when these seeds are dried to 0.25 g g-1 of water content. Catalase and esterase enzymes are good biochemical markers for cryopreserved coffee seeds and their activity is greater in larger seed physiological quality.

RESUMO A Campomanesia rufa é uma espécie frutífera nativa do Brasil considerada como vunerável pela IUCN (International Union for Conservation of Nature) e poucas informações sobre a propagação são encontradas. Neste contexto, o objetivo do presente estudo foi desenvolver protocolos de germinação in vitro, micropropagação e calogênese para a espécie. Para germinação in vitro, as sementes foram inoculadas em meio MS suplementado com GA3 (Ácido Giberelico), para a indução da parte aérea, o meio de cultura foi suplementado com BA (benzilamina), BAP (6-Benzilamina Purina) ou TDZ (Thidiazuron). Para o crescimento da parte aérea, o meio de cultura contendo BA, BAP e TDZ foi mantido sob lâmpadas fluorescentes brancas e sob diodos emissores de luz (LED). O GA3 também foi testado para elongação de brotações in vitro. Para o controle da oxidação, o meio foi suplementado com PVP (polivinilpirrolidona) e para a indução de calos, 2,4-D (Ácido 2,4-diclorofenoxiacético) . Os resultados mostraram 68% de germinação, independentemente da concentração de GA3. No estágio de propagação, BAP a 4,5 µM induziu maior número de brotações (4,53) e lâmpadas de LED como fonte de luz combinada com o meio de cultura com 1 μM de BAP induziu maior número de brotações (4,08). A maior média de comprimento de C. rufa (31,9 mm) foi obtida usando 8,8 µM de GA3. O uso de PVP (584,3 µM) controla até 27,3% de oxidação em explantes de folhas jovens. O uso de 10 µM de 2,4-D leva a uma maior formação de calos (58,7%). Portanto, pode-se concluir que o uso de BAP é eficiente na indução de brotações, o PVP controla a oxidação de segmentos foliares e o 2,4-D induz calos em C. rufa.

ABSTRACT The Campomanesia rufa is a fruitful species native from Brazil considered as endangered by the IUC (International Union for Conservation of Nature) and low information regarding its propagation is available. In this context, the aim of the present study was to develop in vitro germination, micropropagation and callogenesis protocols for the species. For in vitro germination, seeds were inoculated in MS medium supplemented with GA3 (gibberellic acid) and for shoot induction, the medium was supplemented with three different cytokinins BA (benzyladenine), BAP (6-Benzylaminopurine) or TDZ (Thidiazuron). For shoot growth, culture medium containing BA, BAP, TDZ were maintained under white fluorescent lamps and blue:red light-emitting diodes (LED). GA3 was also tested on in vitro shoot elongation. For oxidation control, the medium was supplemented with PVP (polyvinylpyrrolidone) and for callus induction, 2.4-D (dichlorophenoxyacetic acid). The results showed 68% germination regardless of GA3 concentration. In the propagation stage, BAP at 4.5 µM induced a higher number of shoots (4.53) and LED lamps as the light source combined with the culture medium with 1 μM BAP induced a higher number of shoots (4.08). The highest average of C. rufa length (31.9 mm) was obtained using 8.8 µM GA3. The use of PVP (584.3 uM) controls up to 27.3% oxidation in young leaf explants. The use of 10 µM 2.4-D leads to a higher callus formation (58.7 %). Therefore, it can be concluded that the use of BAP is efficient in the induction of shoots, PVP controls oxidation leaf segments, and 2.4-D induces callus in C. rufa.

Resumo: A criopreservação é uma opção viável para a conservação de germoplasma de café. Entretanto, para que essa técnica apresente total sucesso é de fundamental importância realizar pesquisas que garantam a manutenção da integridade celular antes e após a imersão em NL. Portanto, o objetivo neste estudo foi investigar o teor de água, velocidade e temperatura final de resfriamento mais adequados para criopreservar sementes de Coffea arabica L. As sementes foram secadas em sílica gel até teores de água de 5, 10, 15, 20, 30 e 40% bu, submetidas a tratamentos de resfriamento lento nas velocidades -1, -3 e -5 ºC min-1 até às temperaturas finais de -40, -50 e -60 ºC e diretamente imersas em NL. Após armazenamento as sementes foram reaquecidas por dois minutos à 40 ºC. A sobrevivência e a viabilidade de sementes e embriões foram avaliadas por meio do teste de tetrazólio e de germinação. Por meio do teste de tetrazólio, observa-se que embriões excisados das sementes criopreservadas são menos sensíveis à criopreservação quando comparados às sementes inteiras. O teor de água de 20% bu permite maior sobrevivência das sementes de Coffea arabica L., bem como de embriões zigóticos após a criopreservação, dependendo das velocidades e temperaturas finais de pré-resfriamento.

Abstract: Cryopreservation is a viable option for conservation of coffee germplasm. However, for this technique to be completely successful, it is of fundamental importance to carry out studies that ensure maintenance of cell integrity before and after immersion in liquid nitrogen (LN). Therefore, the aim in this study was to investigate the water content, cooling rate, and final temperature most suitable for cryopreservation of Coffea arabica L. seeds. The seeds were dried by silica gel to water contents of 5, 10, 15, 20, 30 and 40 % wb, subjected to slow cooling treatments at speeds of -1, -3 and -5 °C min.-1 to final temperatures of -40, -50 and -60 °C and then directly immersed in LN. After storage, seeds were rewarmed at 40 °C for two minutes. The survival rate and viability of the seeds and embryos were evaluated by the tetrazolium and germination tests. Results of the tetrazolium test indicate that embryos excised from cryopreserved seeds are less sensitive to cryopreservation than whole seeds are. The water content of 20% wb and the use of zygotic embryos led to the highest survival rate of the coffee seeds, depending on the cooling rate and the final temperature of precooling.

RESUMO O dendezeiro é uma monocotiledônea, lenhosa e oleaginosa de elevada importância econômica, devido à alta produção de óleo por seus frutos. A germinação das sementes é, atualmente, o método convencional mais utilizado para a propagação do dendezeiro, porém, o sucesso por meio dessa via é limitado pela demora e a baixa porcentagem de germinação. Uma alternativa para a propagação em larga escala do dendezeiro é a técnica biotecnológica de embriogênese somática, mas o enraizamento das plantas germinadas a partir dos embriões somáticos é uma etapa difícil e de grande importância para posterior aclimatização e sucesso na propagação. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar o efeito das auxinas ácido indol acético (AIA) e ácido indol-butírico (AIB) no enraizamento de embriões somáticos de dendezeiro híbrido Tenera. Plantas obtidas via embriogênese somática foram inoculadas em meio MS modificado, com 10% de sacarose e 0,6% de ágar e suplementado com AIA ou AIB, nas concentrações 5 µM, 10 µM, 15 µM e na ausência de regulador de crescimento. Depois de 120 dias foram analisados os parâmetros presença de raiz, tipo de raiz, comprimento da maior raiz, número de folhas e comprimento da parte aérea. A presença de reguladores de crescimento foi favorável ao enraizamento, tendo as plantas cultivadas com o regulador de crescimento AIB na concentração de 15 µM apresentado maior porcentagem de enraizamento (87%) e melhores resultados para os parâmetros número de raízes (1,33) e comprimento da parte aérea (9,83).

ABSTRACT Oil palm is a woody monocot of economic importance due to high oil production from its fruits. Currently, the conventional method most used to propagate oil palm is seed germination, but success is limited by long time requirements and low germination percentage. An alternative for large-scale propagation of oil palm is the biotechnological technique of somatic embryogenesis. The rooting of plants germinated from somatic embryos is a difficult step, yet it is of great importance for later acclimatization and success in propagation. The aim of this study was to evaluate the effect of the auxins indole acetic acid (IAA) and indole butyric acid (IBA) on the rooting of somatic embryos of Tenera hybrid oil palm. Plants obtained by somatic embryogenesis were inoculated in modified MS medium with 10% sucrose and 0.6% agar and supplemented with IAA or IBA at concentrations of 5 µM, 10 µM, and 15 µM, and the absence of growth regulators. After 120 days, the presence of roots, root type, length of the longest root, number of roots, number of leaves, and shoot length were analyzed. Growth regulators were favorable to rooting; plants cultivated with IBA growth regulator at 15 µM showed higher rooting percentage (87%) and better results for the parameters of number of roots (1.33) and shoot length (9.83).

RESUMO A conservação dos recursos genéticos vegetais é uma medida importante para prevenção do processo de erosão genética. Bancos de sementes são as formas mais comuns de conservação ex situ, entretanto, sementes de cafeeiro não podem ser armazenadas por métodos convencionais. A criopreservação é uma alternativa viável para conservação em longo prazo de espécies, como o cafeeiro, que produzem sementes intermediárias ou recalcitrantes. O objetivo deste trabalho foi criopreservar embriões zigóticos de Coffea arabica L. cv Catuaí Vermelho avaliando o efeito da desidratação antes da criopreservação, e da reidratação osmótica após o descongelamento. Antes da criopreservação foram testados e determinados os teores de umidade em diferentes tempos de desidratação (0, 15, 30, 60 e 120 min). Após a desidratação os embriões foram criopreservados por uma hora em nitrogênio líquido, e após o descongelamento foram reidratados utilizando solução osmótica. Para avaliação da viabilidade de embriões desidratados e/ou criopreservados, utilizou-se o teste com o cloreto de 2,3,5-trifenil tetrazólio. Embriões não desidratados não sobreviveram ao congelamento. Embriões desidratados até cerca de 20% de umidade que não passaram por uma reidratação osmocondicionada, não germinaram. Embriões desidratados até cerca de 20% de umidade, criopreservados e reidratados lentamente após o descongelamento, apresentaram 98% de germinação. A máxima viabilidade obtida através do teste de tetrazólio foi 75% após 60 minutos de desidratação. Portanto, embriões zigóticos de cafeeiro podem ser criopreservados utilizando desidratação física em sílica gel por 60 minutos (23% de teor de umidade), seguida de reidratação com solução osmótica após o descongelamento. Esse método permitiu a germinação de 98% dos embriões criopreservados.

ABSTRACT Conservation of plant genetic resources is important to prevent genetic erosion. Seed banks are the most common method of ex situ conservation; however, coffee seeds can not be stored by conventional methods. Cryopreservation is a viable alternative for long-term conservation of species that produce intermediate or recalcitrant seeds, as coffee. The aim of this work was to cryopreserve Coffea arabica L. cv Catuaí Vermelho IAC 144 zygotic embryos, and analyse the effects of dehydration prior cryopreservation and osmotic rehydration after thawing, in embryos germination and seedlings formation after cryopreservation. Prior to cryopreservation, different dehydration times (0, 15, 30, 60 and 120 min) were tested. Dehydrated embryos were cryopreserved in liquid nitrogen for 1 hour, and after thawing were rehydrated by osmotic solutions. Dehydrated and non-cryopreserved embryos were also analysed. The test with 2,3,5 triphenyl tetrazolium chloride (TTC) was used to evaluate the embryos viability. Non-dehydrated embryos did not survive after freezing. Embryos that were dehydrated until 20% of the moisture content did not germinate when osmotic rehydration was not performed. In contrast, cryopreserved embryos with the same moisture content presented 98% germination when they were rehydrated slowly in osmotic solution. According to tetrazolium tests, embryos presented maximum viability (75%) after dehydration for 60 minutes (23% moisture content). Therefore, coffee zygotic embryos (Coffea arabica L. cv. Catuaí Vermelho) can be successfully cryopreserved using physical dehydration in silica gel for 60 minutes (23% moisture content), followed by osmotic rehydration after thawing. This method allowed a germination of 98% of cryopreserved zygotic embryos.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência da droplet vitrification e vitrificação na criopreservação de ápices caulinares de mangabeira. Foi avaliada a retomada de crescimento de ápices de mangabeira criopreservados conforme a técnica de droplet vitrificationutilizando diferentes tempos de tratamento com a solução de vitrificação (15, 30, 45 e 60 min.) e submetidos a diferentes períodos de pré-cultivo (ausência, 24 ou 48h) em meio com 0,3 M de sacarose antes da criopreservação. Além desta técnica, foi avaliado o efeito da técnica clássica de vitrificação utilizando quatro tempos de exposição à solução de vitrificação (15, 30, 45 e 60 min.). Foram observadas diferenças significativas no tempo de exposição para a técnica de vitrificação e droplet vitrification.Para ambas as técnicas o tempo de imersão de 60 minutos promoveu uma retomada de crescimento superior a 70% nos ápices criopreservados. O pré-cultivo promoveu o aumento na sobrevivência dos explantes criopreservados. As técnicas de criopreservação de ápices caulinares por droplet vitrification e vitrificação mostraram-se viáveis para a conservação em tempo prolongado de mangabeira.

The aim of this study was to evaluate the efficiency of vitrification and droplet vitrification for the cryopreservation of Hancornia speciosa shoot tips. The shoot tips were subjected to four different periods of exposure (15, 30, 45 and 60 min.) to plant vitrification solution 2 (PVS2) before plunging into liquid nitrogen. We evaluated the regrowth of H. speciosa shoot tips that were cryopreserved by the classical vitrification technique and by the droplet vitrification technique. Shoot tips were submitted to different periods of pre-culture (absence, 24 or 48h) in a medium containing 0.3 M sucrose prior to cryopreservation. With a PVS2 exposure period of 60 min., significant differences were observed between the two techniques used in this study with respect to regrowth rates; however, both cryopreservation methods allowed for a shoot tip regrowth rate of over 70%. Use of a preculture step increased the regrowth rate of cryopreserved shoot tips. Shoot tip cryopreservation techniques employing vitrification and droplet vitrification proved to be viable for the long-term storage of mangaba tree samples.

O Brasil é um dos centros de origem do maracujazeiro e possui uma importante variabilidade natural do gênero Passiflora. Muitas espécies selvagens desse gênero são resistentes a algumas pragas e doenças e várias são consideradas medicinais. O objetivo deste trabalho foi induzir calos in vitro a partir de folhas de Passiflora gibertiipara a quantificação de vitamina C e fenóis totais. Uma vez que o balanço adequado entre auxina/citocinina promove a formação de calos e pode otimizar a produção de compostos secundários e vitaminas, calos foram induzidos em meio MS meia-força com uma combinação da auxina Picloram e da citocinina Cinetina, todos na ausência de luz. O teor de vitamina C e de fenóis totais foi quantificado por métodos colorimétricos após diferentes períodos de cultivo dos calos. A indução de calos foi fortemente influenciada pela combinação de Picloram/Cinetina. Foi observado um alto teor de vitamina C (94,8mg 100g-1) durante o período de indução de calos em MS+4,14µM de Picloram+0,207µM de Cinetina. Altas concentrações de Picloram/Cinetina conduzem a um aumento no teor de vitamina C após três subcultivos. Quanto maior a concentração de Picloram (8,28µM)/Cinetina (0,828µM), maior é a produção de fenóis (66mg de ácido tânico 100g-1 de calos) totais durante o período de indução de calos.

Brazil is one of the center of origin of passion fruit and has an important natural variability of the genus Passiflora. Several wild species of this genus are resistant to some pests and diseases and many are considered as medicinal. The aim of this research was to induce callus from in vitro Passiflora gibertiileaf explants for quantification of vitamin C and total phenols. Once the appropriate auxin/cytokine balance promotes callus formation and may optimize the production of secondary compounds and vitamins, calli were induced using a half-strength MS medium with a combination of the auxin Picloran (PIC) and the cytokine Kinetin (KIN). The vitamin C and total phenols were quantified by colorimetric methods from calli after different culture periods. The calli induction was strongly dependent of the combination PIC/KIN. It was observed high vitamin C content (94.8mg 100g-1) during the calli induction period in MS+4.14µM PIC+ 0.207µM KIN. Higher PIC/KIN concentrations promoted an increase in the vitamin C content after three subcultures. The higher PIC (8.28µM)/KIN (0.828µM) concentration was the higher was the total phenols production (66mg tannic acid 100g-1of fresh callus) during the calli induction period.

Byrsonima intermedia A. Juss. é uma planta medicinal e frutífera do Cerrado, cuja propagação convencional é difícil, devido à presença do endocarpo extremamente lignificado. Embora o hipoclorito de sódio (NaOCl) seja amplamente utilizado para a desinfestação superficial, existem poucos relatos de seus efeitos sobre o crescimento do explante. Neste trabalho, o objetivo foi estudar o efeito de diferentes pHs e períodos de exposição de sementes de B. intermedia em uma solução de NaOCl. As sementes foram submetidas a diferentes tempos de exposição (1, 5 e 10 minutos) numa solução de NaOCl com diferentes pHs (5, 7, 10 e 12) e, após o tratamento com hipoclorito de sódio, os embriões foram inoculados em meio WPM com a concentração de 50% de sais sem sacarose, ágar a 0,5% e pH 5,8 e, depois de 75 dias de cultivo, o crescimento das plântulas foi avaliado. A utilização de NaOCl é eficaz na desinfestação de sementes de B. intermedia, independente da variação do pH ou dos períodos de exposição. A porcentagem de plântulas normais, o comprimento da parte aérea e o número de folhas são positivamente afetados pela utilização de solução de NaOCl a pH de 8,5-8,9 ou pelo aumento do período de exposição, enquanto o número de raízes é afetado apenas pelo aumento do período de exposição na solução NaOCl

Frutos e amêndoas de dendezeiro, uma palmeira pertencente ao gênero Elaeis, são amplamente usados para a produção de óleos culinários ou para as indústrias farmacêutica e de cosméticos. Na última década esta palmeira oleífera também emergiu como fonte promissora para a produção comercial de biocombustíveis.Os objetivos deste trabalho foram avaliar o efeito de diferentes meios de cultura, MS (MURASHIGUE; SKOOG) eY3 (EEUWENS)e de carboidratos na germinação in vitro de embriões zigóticos, o efeito dos reguladores de crescimentoGA3, ANA e BAP no desenvolvimento das plântulas in vitro e a taxa de sobrevivência dessas quando aclimatizadasdohíbrido Manicoré(Elaeis oleifera x E. guineensis). Embriões zigóticos foram inoculados em meio de cultivo MS e Y3 modificado, suplementados com diferentes concentrações de sacarose (30, 45 e 60 gL-1) ou sorbitol (36 gL-1) e, após 30 dias a taxa de germinação foi avaliada. Posteriormente, as plântulas foram transferidas para meio de cultivo Y3 modificado suplementado com diferentes concentrações de GA3 (3,5 e 7 mgL-1) ou sem, combinadas ou não com 1 mgL-1de ANA,5 mgL-1 de BAP. A maior porcentagem de embriões germinados (92%) foi obtida em meio de cultivo MS suplementado com 36 gL-1 de sorbitol. Os meios de cultivo suplementados com reguladores de crescimento GA3,, ANA e BAP promoveram maior comprimento da parte aéreaque os meios sem reguladores. As plântulas com raiz apresentaram a maior porcentagem de sobrevivência (85%) durante a aclimatização.

Fruits and almond from the dendezeiro, oil palmbelonging to the Elaeis genus,are widely used for the production of cookingoils or for the pharmaceutical and cosmetic industries.In the last decade, this oil palm also emerged as a promising source for commercialbiofuel production. This study evaluated the effect of different culture media, MS (MURASHIGUE AND SKOOG) and Y3 (EEUWENS)and carbohydrates duringin vitro germination of zygotic embryos, the effect of growth regulators GA3, NAA and BA Ponin vitro seedling development, and the survival rate of acclimatized seedlingsof Manicoré hybrid (Elaeis oleifera x E. guineensis). Zygotic embryos were inoculated on MS and modified Y3 media, supplemented with different sucrose concentrations (30, 45, and 60 gL-1) or sorbitol (36 gL-1), and the germination rate was evaluated after 30 days. Subsequently, seedlings were transferred to modified Y3 culture medium supplemented with differentGA3 concentrations (3.5 and 7 mgL-1) or without it, combined or not with 1 mgL-1 of NAA, 5 mgL-1 of BAP.The highest germinationpercentage of germinated embryos (92%) was observed in MS medium supplemented with 36 gL-1 sorbitol. Culture media supplemented with growth regulatorsGA3, NAA and BAP promoted greater shoot lengththan control media. Rooted seedlings showed high survival percentage (85%) during acclimatization.

Byrsonima intermedia é um arbusto do Cerrado brasileiro com propriedades medicinais. A conservação de material biológico em temperatura ultrabaixa (-196ºC) é conhecida como criopreservação e representa uma técnica promissora para a preservação da diversidade vegetal. O descongelamento é uma etapa crucial durante a criopreservação. O objetivo deste trabalho foi criopreservar embriões de zigóticos B. intermedia e realizar o descongelamento utilizando uma solução rica em sacarose à temperatura ambiente. Os embriões foram submetidos à desinfestação e dessecação em uma câmara de fluxo laminar por 0-4 horas antes da imersão em nitrogênio líquido. O teor de umidade (%) dos embriões foi avaliado. Embriões criopreservados foram descongelados em uma solução rica em sacarose à temperatura ambiente antes da inoculação em meio de germinação e mantidos em sala de crescimento. Após 30 dias, a germinação dos embriões foi avaliada. Após uma hora de desidratação não foram observadas diferenças estatísticas entre os diferentes tempos testados. Embriões com teor de umidade entre 34,3 e 20,3% germinaram após a criopreservação. Embriões não desidratados não sobreviveram ao processo de criopreservação. Embriões zigóticos B. intermedia podem ser criopreservados com sucesso e descongeladas à temperatura ambiente quando desidratados por pelo menos uma hora em câmara de fluxo laminar.

Byrsonima intermedia is a shrub from the Brazilian Cerrado with medicinal properties. The storage of biological material at ultra-low temperatures (-196°C) is termed cryopreservation and represents a promising technique for preserving plant diversity. Thawing is a crucial step that follows cryopreservation. The aim of this work was to cryopreserve B. intermedia zygotic embryos and subsequently thaw them at room temperature in a solution rich in sucrose. The embryos were decontaminated and desiccated in a laminar airflow hood for 0-4 hours prior to plunging into liquid nitrogen. The embryo moisture content (% MC) during dehydration was assessed. Cryopreserved embryos were thawed in a solution rich in sucrose at room temperature, inoculated in a germination medium and maintained in a growth chamber. After 30 days, the embryo germination was evaluated. No significant differences were observed between the different embryo dehydration times, where they were dehydrated for at least one hour. Embryos with a MC between 34.3 and 20.3% were germinated after cryopreservation. In the absence of dehydration, all embryos died following cryopreservation. We conclude that B. intermedia zygotic embryos can be successfully cryopreserved and thawed at room temperature after at least one hour of dehydration in a laminar airflow bench.

O objetivo deste trabalho foi caracterizar e comparar dois tipos de calos de explantes foliares de Coffea arabica (cultivar Catiguá). Células de diferentes tipos de calos foram caracterizadas quanto a viabilidade e características morfológicas externas e internas. Foram obtidos dois tipos de calos morfologicamente distintos: (a) amarelo friável e (b) transparente aquoso. Os calos amarelos friáveis apresentaram maior viabilidade celular e características embriogênicas. Microscopia eletrônica de varredura e transmissão mostraram características embriogênicas em calos amarelos friáveis evidenciadas pela presença de células pequenas e isodiamétricas. Os calos transparentes aquosos apresentaram células alongadas e vacuolizadas.

The aim of this research was to characterize and compare two types of calli from leaf explants of Coffea arabica (cultivar Catiguá). Cells of different types of callus were successfully characterized regarding viability and internal and external morphological characteristics. It was obtained two morphologically distinct types of callus: (i) yellow friable and (ii) transparent watery. The yellow friable calli showed higher cell viability and embryogenic characteristics. Scanning and transmission electron microscopy showed embryogenic characteristics in cells of the yellow friable calli evidenced by the presence of small and isodiametric cells, while transparent watery calli showed elongated cells and large cytoplasm vacuolization.

Annona glabra é uma espécie frutífera tropical que apresenta elevado potencial agronômico pelo fornecimento de frutos para o consumo in natura e pela produção de fitofármacos. O cultivo in vitro tem sido preconizado como a forma mais adequada de propagação para essa espécie, embora sua utilização em larga escala ainda seja limitada pela elevada taxa de abscisão foliar, reduzida taxa de multiplicação dos explantes e crescimento lento das brotações. Objetivou-se, neste trabalho, avaliar o efeito de citocininas sobre o acúmulo de minerais nas brotações de A. glabra cultivadas in vitro e seus reflexos sobre o crescimento e sobrevivência das plantas nesse tipo de ambiente. Brotações de A. glabra foram cultivadas em meio Wood Plant Medium (WPM), na presença de 6-benzilaminopurina (BAP), thidiazuron (TDZ), cinetina (KIN) e zeatina (ZEA). A utilização de KIN e BAP induziu maior crescimento, maior acúmulo de massa seca, maior desenvolvimento da área foliar e maior taxa de sobrevivência das plantas durante o cultivo in vitro dessa espécie. Todas as fontes de citocininas testadas estimularam maiores acúmulos de nitrogênio e boro nas brotações e menores de cálcio.

Annona glabra is a tropical species that has significant agronomic potential in terms of furnishing fruits for in natura consumption and for the production of phyto-pharmaceuticals. In vitro cultivation has been considered the most promising form of propagation for this species, although large scale utilization of this technique is currently limited by high rates of leaf abscission, reduced rates of explant multiplication and slow bud growth. The present work evaluated the effects of different cytokinins on mineral accumulation in shoots of A. glabra cultivated in vitro, and their effects on growth and survival of these plants. Buds of A. glabra were cultivated in Wood Plant Medium (WPM) in the presence of 6-benzilaminopurine (BAP), thidiazuron (TDZ), kinetin (KIN), and zeatin (ZEA). KIN and BAP use resulted in the greatest growth, largest accumulation of dry mass and leaf area development, as well as the greatest survival rate during in vitro cultivation of this species. All cytokinins tested stimulated large accumulations of nitrogen and boron in shoots, but diminished levels of calcium as compared to controls.

O objetivo desta pesquisa foi determinar um protocolo de micropropagação para o barbatimão. Para indução de brotações, os segmentos nodais foram inoculados em meio de cultura MS com diferentes concentrações de cinetina (0, 1, 2, 3, 4 e 5mg L-1). Para indução de raízes, brotações obtidas "in vitro" foram inicialmente transferidas para meio MS contendo 50% da concentração de sais e com diferentes concentrações de ANA (0, 1, 2, 3 e 4mg L-1). Posteriormente, as brotações foram transferidas para meio MS contendo 50% da concentração de sais, suplementado com carvão ativado. Para a aclimatização, as plantas obtidas foram transferidas para tubetes contendo diferentes substratos e, então, envolvidas com saco plástico transparente para auxiliar temporariamente na manutenção da umidade. As concentrações de 1 e 5mg L-1 de cinetina foram as mais eficientes na indução de gemas e brotos, respectivamente. Brotações com maiores comprimentos foram observadas em meio de cultura suplementado com 1mg L-1 de cinetina. Raízes em maior número e comprimento foram observados em meio de cultura suplementado com 4mg L-1 de ANA. Os substratos utilizados não afetaram significativamente a taxa de sobrevivência das plantas durante a fase de aclimatização.

The objective of the research was to determine a micropropagation protocol for the specie Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville. For shoot induction, nodal segments were inoculated in MS medium with different concentrations of kinetin (0, 1, 2, 3, 4 e 5mg L-1). For root induction, initially the shoots obtained 'in vitro' were transferred to MS containing 50% of salt concentration and with different concentrations of NAA (0, 1, 2, 3 e 4mg L-1). Lately, the shoots were moved to MS medium containing 50% of salt concentration, supplemented with activated charcoal. For acclimatization, the plants obtained were moved to plastic tubes containing different substrates and then covered with transparent plastic bags in order to maintain the environment humidity. The kinetin concentrations of 5.0 and 1.0mg L-1 were the most efficient for the induction of shots and buds, respectively. Shoot with a higher lengh were observed in MS medium supplemented with 1.0mg L-1 of kinetin. Roots in a higher number and length were observed in MS medium supplemented with 4.0mg L-1 of NAA. The substrates used had no significant effect on the rate of plant survival during the acclimatization stage.

O Inga vera Will subsp. affinis (DC). T.D. Penn. é uma espécie frutífera nativa do Cerrado, importante na recuperação de matas ciliares degradadas. Entretanto, apresenta sua propagação dificultada pelo fato de suas sementes serem recalcitrantes, ou seja, não tolerarem a perda de água. O objetivo deste trabalho foi estudar aspectos da germinação ex vitro e in vitro de ingazeiro. Para tanto, foram avaliados os efeitos de diferentes substratos: areia, Plantmax® e Areia+ Plantmax®; diferentes concentrações de sais: WPM, WPM/2, MS e MS/2, e diferentes concentrações de GA3 (0, 5, 10, 17 e 20 µM) no meio de cultura. Observou-se que, na germinação ex vitro, o substrato Plantmax® proporcionou maior porcentagem de germinação (82%). Com relação à germinação in vitro, a maior percentagem de germinação foi obtida utilizando-se meio de cultura WPM/2 (96%). A adição de GA3 no meio de cultura não foi estatisticamente significativa, no entanto, a concentração de 20 µM de GA3 proporcionou um aumento na germinabilidade de sementes de ingazeiro.

The Inga vera Will subsp. affinis (DC). T.D. Penn. is fruit native specie from cerrado, commonly for recovering devastated areas. However, its propagation is complicated due to the fact that the seeds are recalcitrant and does not support water loss. The objective of this work was to study Inga vera Willd. subsp. affinis (DC.) T.D. Penn. ex vitro and in vitro germination aspects. For this purpose, different substrates: sand, Plantmax® and sand+ Plantmax®; different salt concentrations: WPM, WPM/2, MS and MS/2, and different GA3 concentrations (0, 5, 10, 17 and 20 µM) were evaluated. The results showed that, in the ex vitro germination, the use of Plantmax® provided the highest germination percentage (82%). Regarding the in vitro germination, highest percentage was observed using WPM/2 (96%). The addition of GA3 was not statistically significant although the concentration of 20 µM promoted an increase in the germination of Inga vera seeds.